ELISA技術(shù)支持

ELISA實驗做完了，數(shù)據(jù)結(jié)果咋解讀？看這里！

發(fā)布時間：2025-03-20 發(fā)布作者：上海通蔚生物

酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）是一種常用免疫學檢測方法，基于抗原抗體特異性反應(yīng)原理，定性或定量檢測特定目標分子來獲得實驗結(jié)果。那么，ELISA數(shù)據(jù)結(jié)果如何判斷實驗結(jié)果的好壞？評估ELISA數(shù)據(jù)好壞的關(guān)鍵在于以下四個方面：

檢測內(nèi)精度

檢測內(nèi)精度是指在同一次實驗中，對相同樣本在同一塊酶標板上進行多次重復(fù)測定（例如，至少3-5次）所得到結(jié)果一致。通常用變異系數(shù)（CV）來評估，CV=標準差/平均數(shù)。每個樣品的CV值應(yīng)小于10%，較低的CV值代表更好的重復(fù)性。CV值越高（例如超過10%），則提示孔與孔之間差異較大，重復(fù)性不好，結(jié)果可靠性較低。CV值大的原因可能包括移液不準確、試劑濺入其他孔中、樣本或試劑受污染、酶標板溫度不一致等。

稀釋線性度

稀釋線性度是指樣品在被稀釋后，測得的濃度與預(yù)期濃度之間呈線性關(guān)系的程度，它反映了方法在不同濃度范圍內(nèi)的準確性和可靠性。通常用回收率來評估，即測量值與預(yù)期值的比值。理想情況下，在不同稀釋倍數(shù)下，回收率應(yīng)該保持一致，并在可接受的范圍內(nèi)(例如，80%-120%，或在方法驗證中預(yù)先設(shè)定的范圍內(nèi))。

在沒有顯著基質(zhì)干擾的情況下，稀釋倍數(shù)的改變理論上不應(yīng)顯著影響測量值。然而，基質(zhì)效應(yīng)的存在會使測量結(jié)果偏離線性關(guān)系?；|(zhì)效應(yīng)是指樣品中除目標分析物以外的成分對測量結(jié)果產(chǎn)生的干擾，它可以導(dǎo)致測量值偏高或偏低。當樣品被稀釋時，基質(zhì)成分也被稀釋，從而可能改變基質(zhì)效應(yīng)的程度，導(dǎo)致測量值隨稀釋倍數(shù)的改變而發(fā)生非線性的變化。

回收率

回收率是指在樣品中添加已知濃度的標準物質(zhì)后，實際測得的濃度與添加濃度的比值，通常用百分比表示。它用于評估樣品基質(zhì)對目標物質(zhì)檢測的影響。例如，待測上清液中存在的大量蛋白質(zhì)等基質(zhì)成分可能會干擾抗原抗體反應(yīng)，降低信噪比，導(dǎo)致目標物質(zhì)的測量濃度低于實際值（基質(zhì)抑制效應(yīng)）。

回收率實驗通常分為加標回收率和提取回收率。通過將已知濃度的標準物質(zhì)加入到不同的樣品基質(zhì)中，然后進行檢測，可以計算出回收率。如果平均回收率在可接受的范圍內(nèi)（例如，80%-120%，或在方法學驗證中預(yù)先設(shè)定的范圍內(nèi)），則認為樣品基質(zhì)對檢測準確定量分析物的能力影響較小。

靈敏度（檢測限）

分析方法的靈敏度是指響應(yīng)量的變化與引起該變化的待測物質(zhì)濃度或量之比。在實際應(yīng)用中，常用檢測限來表示靈敏度。檢測限是指在規(guī)定的置信水平（通常為95%）下，能夠被檢測到的最低分析物濃度。常用的檢測限指標包括LOB、LOD和LOQ：

LOB(LimitofBlank):在規(guī)定的置信水平（通常為95%）下，從一系列空白樣本測量結(jié)果的統(tǒng)計分析中得到的最高表觀分析物濃度。
LOD(LimitofDetection):在規(guī)定的置信水平（通常為95%）下，能夠被檢測到的最低分析物濃度。此時，分析物產(chǎn)生的信號能夠與背景噪音區(qū)分開，但并不一定能夠準確定量。
LOQ(LimitofQuantitation):在規(guī)定的置信水平（通常為95%）下，能夠被準確定量的最低分析物濃度。在LOQ及以上濃度，測量結(jié)果的準確度和精密度都滿足預(yù)定的要求。