牛血清在細胞培養(yǎng)中的應(yīng)用與選擇指南

  細胞培養(yǎng)是指在生理條件下使真核或原核細胞生長的實驗室方法。其起源可追溯到20世紀(jì)初，當(dāng)時它被用于研究組織生長和成熟、病毒生物學(xué)和疫苗開發(fā)、基因在疾病和健康中的作用以及使用大規(guī)模雜交細胞系來生產(chǎn)生物制藥。胎牛血清（FBS）是一種用于細胞培養(yǎng)的天然培養(yǎng)基，含有大量細胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，常用于動物細胞的體外培養(yǎng)。接下來本文將為大家介紹牛血清在細胞培養(yǎng)中的作用。

 

  牛血清成分和功能

 

  牛血清分為胎牛血清、成年牛血清等，目前細胞培養(yǎng)較為常見的是胎牛血清。胎牛血清是從從胎牛（一般為胎牛臍靜脈）血液中提取的血清，是細胞培養(yǎng)中最常用的培養(yǎng)基添加劑之一，含有大量的生長因子和營養(yǎng)物質(zhì)，能夠促進細胞生長和增殖。

 

  牛血清的成分

 

  胎牛血清(FBS)是一種經(jīng)過時間考驗的通用補充劑，用于細胞培養(yǎng)。它提供了許多已被證明可以滿足細胞培養(yǎng)的特定代謝要求的化合物，包括激素、生長因子(如胰島素樣生長因子、表皮生長因子、血小板衍生生長因子、成纖維細胞生長因子)、細胞附著因子、pH緩沖劑、蛋白酶抑制劑、維生素、礦物質(zhì)、脂質(zhì)(如膽固醇)以及各種未定義的成分。FBS還可以提供轉(zhuǎn)鐵蛋白，促進細胞對鐵離子的吸收。除了提供營養(yǎng)，FBS還可以作為抗氧化劑，幫助細胞抵抗氧化應(yīng)激，并促進細胞遷移和分化。

 

  牛血清作用

 

  針對牛血清，實驗室常見的是胎牛血清（FBS），成分圍繞FBS來介紹。是在采集血液后，經(jīng)過離心去除血細胞和血漿中的凝固因子（如纖維蛋白）制成的，并經(jīng)過過濾和滅菌處理以去除污染物。雖然FBS的成分和含量會受到牛的品種、年齡、健康狀況等因素的影響，但它含有許多對細胞生長至關(guān)重要的物質(zhì)，包括生長因子(如EGF、IGF、PDGF)，激素(如胰島素、雌激素)，蛋白質(zhì)(如轉(zhuǎn)鐵蛋白、白蛋白)，輔因子(如維生素)，礦物質(zhì)(如鈣、磷)等。此外，FBS中還存在一些尚未被完全識別的成分，它們可能對細胞生長和分化起到重要的作用。

 

  FBS中含有的細胞外基質(zhì)蛋白，例如纖連蛋白和層粘連蛋白，可以促進細胞的粘附和生長。FBS中的白蛋白也可以通過與細胞表面的受體結(jié)合，促進細胞的粘附。

 

  FBS中的生長因子和細胞因子不僅可以促進細胞生長，還可以影響細胞的分化和功能。例如，EGF促進表皮細胞生長，IGF促進肌肉細胞生長。

 

  FBS可以促進細胞生長和增殖，縮短細胞培養(yǎng)周期，提高細胞產(chǎn)量，降低研究成本。FBS在不同細胞培養(yǎng)體系中的應(yīng)用，例如，在干細胞培養(yǎng)、腫瘤細胞培養(yǎng)、病毒培養(yǎng)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。

 

  然而，FBS也存在一些局限性，例如批次間差異、潛在的病毒污染風(fēng)險，以及倫理問題。因此，需要仔細選擇和驗證FBS，并關(guān)注其質(zhì)量控制。

 

  牛血清在細胞培養(yǎng)中的應(yīng)用

 

  牛血清在不同細胞類型中的應(yīng)用

 

  牛血清，尤其是胎牛血清，在多種細胞類型的培養(yǎng)中被廣泛應(yīng)用。不同的細胞類型對血清成分的需求不同，牛血清可以滿足大多數(shù)細胞的生長需求。

 

  哺乳動物細胞

 

  細胞系（如HeLa、293T、CHO細胞）：牛血清為這些細胞提供了必需的生長因子、激素和營養(yǎng)物質(zhì)，促進細胞的增殖和代謝活動。

 

  干細胞（如胚胎干細胞和間充質(zhì)干細胞）：牛血清有助于維持干細胞的多能性和自我更新能力。培養(yǎng)干細胞時通常會使用經(jīng)過篩選和處理的高質(zhì)量血清。

 

  初代細胞

 

  初代培養(yǎng)細胞（如成纖維細胞、內(nèi)皮細胞）：牛血清中的生長因子和營養(yǎng)物質(zhì)對初代細胞的存活和增殖至關(guān)重要。初代細胞對培養(yǎng)條件較為敏感，血清的質(zhì)量直接影響細胞的生長狀態(tài)。

 

  原代培養(yǎng)細胞

 

  動物組織衍生的原代細胞：這些細胞直接從動物組織中分離出來，牛血清中的營養(yǎng)成分有助于細胞從組織環(huán)境中適應(yīng)體外培養(yǎng)條件，并促進細胞的附著和擴增。

 

  牛血清在不同培養(yǎng)階段的作用

 

  牛血清在細胞培養(yǎng)的不同階段起到不同的作用，主要包括以下幾個階段：

 

  細胞貼壁階段

 

  細胞貼壁和附著：牛血清中的黏附因子和細胞外基質(zhì)成分（如纖連蛋白、層粘連蛋白等）有助于細胞在培養(yǎng)基底物上的附著。這對于貼壁細胞（如成纖維細胞、內(nèi)皮細胞）尤為重要。

 

  細胞生長和增殖階段

 

  提供生長因子和營養(yǎng)物質(zhì)：牛血清含有多種生長因子（如胰島素樣生長因子、表皮生長因子等）、維生素、激素和微量元素，這些成分能促進細胞的分裂和增殖。

 

  維持細胞代謝活動：血清中的糖類、脂類和氨基酸等營養(yǎng)成分為細胞提供能量和代謝所需的物質(zhì)。

 

  細胞傳代和擴增階段

 

  細胞存活和恢復(fù)：在細胞傳代過程中，細胞可能受到機械應(yīng)力和消化酶（如胰酶）的影響，牛血清中的保護因子能幫助細胞恢復(fù)并提高存活率。

 

  促進細胞增殖：傳代后的細胞需要重新進入生長期，牛血清中的生長因子和營養(yǎng)物質(zhì)能迅速促進細胞的增殖。

 

  細胞分化階段

 

  誘導(dǎo)和維持分化狀態(tài)：對于需要分化的細胞（如干細胞、前體細胞），牛血清中的特定成分能誘導(dǎo)細胞向特定方向分化，并維持其分化狀態(tài)。根據(jù)實驗需要，研究人員可能會選擇特定類型的牛血清或血清替代物以調(diào)控分化過程。

 

  牛血清的選擇與質(zhì)量控制

 

  通蔚提示，在選擇牛血清不要隨便購買，這些會影響血清的質(zhì)量。如何選擇血清，下面詳細介紹一下。

 

  中國海關(guān)允許進口的血源地

 

  雖然產(chǎn)血清的國家和地區(qū)較多，但目前世界上僅有少數(shù)國家的血清感染風(fēng)險評估符合中國海關(guān)要求，包括澳大利亞、新西蘭、烏拉圭、德國、英國等。因此，在挑選血清時一定要注意來源地，也能極大降低感染疾病的風(fēng)險。除了血源地，還需要關(guān)注供應(yīng)商的資質(zhì)和信譽，以及他們對血清質(zhì)量的控制措施。

 

  產(chǎn)品嚴(yán)格質(zhì)控

 

  由于牛血清在人科學(xué)研究和生物制藥生產(chǎn)中非常重要，很多國家都將其納入藥典，在我國的中華人民共和國藥典Ch.P中規(guī)定了牛血清的定義和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。此外，一些國際標(biāo)準(zhǔn)(例如ISO標(biāo)準(zhǔn))也對FBS的質(zhì)量提出了要求。一些供應(yīng)商會提供FBS的質(zhì)量檢測報告，例如蛋白質(zhì)含量、內(nèi)毒素含量、病毒檢測結(jié)果等，可以參考這些報告選擇質(zhì)量更可靠的FBS。

 

  除了藥典規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，FBS中的內(nèi)毒素含量也是一個重要的質(zhì)量控制指標(biāo)，因為內(nèi)毒素會對細胞造成毒性作用，影響實驗結(jié)果。

 

  批間差異小

 

  血清批間差是客觀存在的，因為血清制品來源于天然活體，供體牛的生理狀況、健康狀況均不同，且受飼養(yǎng)環(huán)境的地形、風(fēng)貌、飲食、水源等影響，體內(nèi)各類蛋白、生長因子和酶類的含量均有巨大差異，所以血清具有含量復(fù)雜且不固定的特性，批間差異在所難免。即使是相同品牌的胎牛血清，在蛋白質(zhì)含量等方面，也可能會存在批次差異。

 

  一些供應(yīng)商會提供FBS的批次間一致性數(shù)據(jù)，例如蛋白質(zhì)含量、生長因子活性等指標(biāo)的變異系數(shù)，可以參考這些數(shù)據(jù)選擇批次間差異更小的FBS。如果不得不使用不同批次的胎牛血清，請進行驗證實驗以確保結(jié)果的可重復(fù)性。

 

  其他選擇建議

 

  除了選擇優(yōu)質(zhì)的FBS，還需要根據(jù)細胞類型、培養(yǎng)目的、實驗設(shè)計等因素選擇合適的FBS。如果可能的話，盡量選擇已驗證過的FBS，以減少實驗中的不確定因素。對于一些敏感的細胞類型或?qū)嶒?，可以選擇無血清培養(yǎng)基或其他替代品，以降低FBS帶來的風(fēng)險。

 

  綜合上述，我們了解到牛血清在細胞培養(yǎng)中的作用，充分了解牛血清，便于我們在實驗過程中為細胞選擇合適的牛血清。